Определение резус-фактора экспресс-методом

О компанииО насРегистрационные удостоверенияПатенты ПродукцияСтандартные эритроцитыПланшеты для типирования крови человека Прайс-лист Новости МетодикиРуководство по эксплуатацииПаспорт на планшет Методическая информация Контакты

Приводим пошаговое описание методики определения резус-фактора экспресс-методом с помощью универсального реагента  антирезус Rh0(D), содержащего неполные поликлональные IgG анти-D антитела, в пробирке без подогрева. Публикуем подробное руководство по постановке реакции конглютинации с желатином с применением стандартного реагента Rh0(D) или цоликлона Анти-D. Доказываем преимущества использования цоликлонов Анти-D-супер и Анти-D по сравнению с универсальным реагентом.

В состав стандартного универсального реагента антирезус Rh0(D) входят поликлональные неполные IgG анти-D антитела. Для подтверждения достоверности определения резус-фактора крови донора экспресс-методом необходимо провести проверку контрольных образцов стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. При проведении контрольного исследования используйте тест-эритроциты Rh+ группы 0 или совпадающей по системе AB0 группы и одногруппные по AB0 тест-эритроциты Rh-.

Методика постановки реакции в пробирке без подогрева

1. Внесите на дно пробирки одну каплю реагента антирезус Rh0(D).

2. Добавьте к содержимому пробирки одну каплю анализируемых эритроцитов.

отбор взвеси эритроцитов

3. Встряхните пробирку для перемешивания жидкостей.

4. Наклоните пробирку практически до горизонтального положения и с небольшой скоростью поворачивайте вокруг вертикальной оси не менее трех минут. Рассредоточение эритроцитов по стенкам способствует более выраженным результатам реакции.

Результат реакции агглютинации обычно проявляется уже в первую минуту взаимодействия исследуемой крови с универсальным реагентом. При этом следует осуществлять контакт анализируемых образцов крови с Rh0(D) как минимум три минуты: возможно замедленное наступление агглютинации при наличии слабого антигена Du.

5. Добавьте 2 – 3 мл изотонического раствора NaCl и 2 – 3 раза переверните пробирку без взбалтывания. Хлорид натрия исключает проявление неспецифической агглютинации.

6. Оцените результат реакции визуально. Выраженные агглютинаты на фоне прозрачной жидкости говорят о наличии антигена D, равномерно окрашенная жидкость без агрегации эритроцитов – свидетельство резус-отрицательной крови.

агглютинаты на фоне прозрачной жидкости

Результат определения резус-фактора экспресс-методом достоверен только в случае положительного результата реакции универсального реагента со стандартными эритроцитами Rh+ и отрицательного – с тест-эритроцитами Rh-.

тест-эритроциты ID-DiaCell

Постановка реакции конглютинации с желатином

Реакция проходит с использованием стандартного реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона Анти-D.

1. Внесите в пробирку приблизительно 0,05 мл (одну каплю) анализируемой крови или 50 % взвеси эритроцитов в сыворотке.

2. Подогрейте 10 % раствор желатина до жидкого состояния.

3. Добавьте к исследуемому образцу крови 0,1 мл (две капли) желатина.

4. Внесите 0,1 мл (две капли) реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона Анти-D.

добавление цоликлона Анти-D IgG

5. Перемешайте содержимое.

6. Подогрейте пробирку в водяной бане при 37 °C в течение 10 минут.

7. Долейте 5 – 8 мл раствора NaCl.

8. Перемешайте жидкости, осторожно перевернув пробирку 1 – 2 раза.

9. Проведите оценку результата реакции невооруженным глазом, допускается использование лупы. Явно выраженные агрегаты различного размера на фоне прозрачного раствора свидетельствуют об обнаружении антигена D, равномерно окрашенная жидкость без наличия агглютинатов – признак отсутствия агглютиногена.

равномерно окрашенная жидкость

10. Подтвердите достоверность исследования контрольным определением.

Результаты достоверны, если реагент антирезус (цоликлон Анти-D) дает положительный результат реакции с тест-эритроцитами Rh+, отрицательный – с Rh-, а желатин не агглютинирует анализируемый образец крови при отсутствии анти-D антител.

При неадекватных результатах контрольного исследования повторите определение резус-фактора экспресс-методом с заменой типирующего реагента и/или желатина. В случае мелкозернистой агглютинации проведите дополнительное исследование эритроцитов в непрямой реакции Кумбса.

реагент АГС

Сравнение различных методов определения резус-фактора

С целью выбора оптимального метода типирования крови специалисты в области трансфузиологии провели сравнительную оценку эффективности применения цоликлонов Анти-D-супер, Анти-D двух разных серий и универсального реагента антирезус Rh0(D) для определения резус-фактора экспресс-методом в пробирке без подогрева (Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови/Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. — СПб.: Питер, 2000. — 308 с.). При сравнении методов анализа учитывали такие критерии, как скорость и специфичность реакции, выраженность агглютинации, выявление слабых форм антигена Du.

При проведении сравнения анализировали 3778 образцов крови доноров. При первичном определении выявили 418 (11,1 %) резус-отрицательных образцов, из которых на втором этапе исследования 42 (1,1 %) образца отнесли к резус-положительным ввиду обнаружения фенотипа D-C+.

При сравнении анализа на наличие антигена D с использованием Анти-D-супер и Rh0(D) выявили значительные преимущества применения цоликлона Анти-D-супер: высокую скорость наступления реакции, выраженный характер агглютинации, возможность проведения исследования на плоскости. Результаты сравнения методов приведены в Таблице № 1.

Таблица № 1. Сравнения результатов типирования крови доноров с помощью цоликлона Анти-D-супер и универсального реагента антирезус Rh0(D).

Параметр сравнения Цоликлон Анти-D-супер Универсальный реагент антирезус Rh0(D)
Скорость реакции 8 – 10 секунд 3 – 4 минуты
Выраженность агглютинации (от + до ++++) ++++ +++ и ++++
Специфичность да да

Цоликлон Анти-D-супер

418 резус-отрицательных образцов крови доноров дополнительно анализировали на наличие антигена D с помощью универсального реагента Rh0(D) в пробирке без подогрева и цоликлона Анти-D в желатиновом тесте. По итогам второго этапа исследования, в трех образцах эритроцитов (0,08 %) выявили слабый антиген Du. Цоликлон Анти-D продемонстрировал более высокую достоверность обнаружения слабых форм антигена D ввиду абсолютной специфичности и высокого титра (1:512) антител класса IgG по сравнению с универсальным реагентом антирезус Rh0(D), использование которого основано на усилении действия неполных антител полиглюкином, что может вызывать неспецифическую агглютинацию и затруднить трактовку результатов реакции.

Цоликлон Анти-D

Переливание крови без риска для жизни