Реакция Кумбса

О компанииО насРегистрационные удостоверенияПатенты ПродукцияСтандартные эритроцитыПланшеты для типирования крови человека Прайс-лист Новости МетодикиРуководство по эксплуатацииПаспорт на планшет Методическая информация Контакты
Реакция Кумбса – эффективный метод выявления антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител крови человека в непрямой реакции агглютинации. Основа теста – использование при типировании антигенов эритроцитов специфических моноклональных реагентов на основе иммуноглобулинов класса G (IgG) с последующим применением на втором этапе реакции антиглобулиновой сыворотки Кумбса (АГС).

АГС производится путем смешивания сыворотки из крови лабораторных животных, иммунизированных иммуноглобулинами класса G человека, и моноклональных антител к одному из компонентов – C3D комплементу сыворотки человека. АГС вызывает агглютинацию эритроцитов, сенсибилизированных специфическими антителами. При отсутствии антител на эритроцитах под воздействием АГС положительная реакция не происходит.

Непрямая реакция Кумбса позволяет определить наличие:

  • антигенов эритроцитов, выявляемых IgG-реагентами («неполными» антителами, например, моноклональными реагентами анти-D, анти-FYa, анти-FYb);
  • антиэритроцитарных антител класса IgG.

Непрямой антиглобулиновый тест: выявление антигенов эритроцитов

Приводим методику непрямой реакции Кумбса на примере цоликлона анти-D IgG.

  1. Промаркируйте чистую пробирку: укажите ФИО исследуемого лица.
  2. Внесите в пробирку 2 капли (приблизительно 0,1 мл) цоликлона анти-D IgG.
  3. Добавьте 2 капли 5 % взвеси предварительно отмытых физиологическим раствором анализируемых эритроцитов. Смешайте исследуемые образцы с цоликлоном.
  4. Инкубируйте смесь на водяной бане или в термостате при 37 °С на протяжении 30 минут.
  5. Добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 - 10 мл физраствора.
  6. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g при 18 – 25 °С на протяжении одной минуты.
  7. Удалите физраствор.
  8. Повторно проведите процедуру отмывки эритроцитов с помощью центрифугирования еще 2 – 3 раза.
  9. Добавьте 2 капли антиглобулиновой сыворотки к осадку кровяных телец, выполните перемешивание.
  10. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g в течение минуты при температуре 18 – 25 °С.
  11. Добавьте с помощью дозатора или пастеровской пипетки 3 – 5 капель физраствора.
  12. Ресуспендируйте осадок и визуально оцените наличие агглютинации. Выраженные агглютинаты на дне пробирки на фоне прозрачного раствора свидетельствуют об обнаружении антигена эритроцитов. Непрозрачная суспензия кровяных телец говорит об отсутствии антигена.
маркировка пробирки
маркировка пробирки
добавление цоликлона в пробирку
добавление цоликлона в пробирку
отбор образца крови
отбор образца крови
инкубация смеси в термостате
инкубация смеси в термостате
центрифугирование пробирки
центрифугирование пробирки
внесение антиглобулиновой сыворотки
внесение антиглобулиновой сыворотки
агглютинаты на дне пробирки
агглютинаты на дне пробирки
непрозрачная суспензия – отрицательный результат
непрозрачная суспензия – отрицательный результат

Реакция Кумбса: скрининг изоиммунных антиэритроцитарных антител

Исследование осуществляется в рамках проведения пробы на индивидуальную совместимость по всем антигенам эритроцитов крови донора и реципиента. Заключение о полной совместимости сыворотки реципиента с эритроцитами донора производят на основании отсутствия гемолиза и/или агглютинации на всех этапах проведения анализа. Признаки гемолиза и/или агглютинации на каком-либо этапе тестирования говорят о несовместимости образцов крови.

Оценка совместимости по системе АВ0, обнаружение «холодовых» антител

  1. Приготовьте образец крови донора:
    • внесите в пробирку автоматическим дозатором 0,2 мл крови;
    • 3 раза отмойте эритроциты в 5,0 мл физиологического раствора;
    • ресуспендируйте осадок в 3 – 4 мл раствора с низкой ионной силой LISS.
  2. Промаркируйте вторую чистую пробирку: укажите ФИО реципиента и ФИО донора.
  3. Внесите автоматическим дозатором 0,1 мл сыворотки реципиента в промаркированную пробирку.
  4. Добавьте 2 капли 5 % суспензии эритроцитов в растворе LISS.
  5. Без промедления центрифугируйте смесь с центробежным ускорением 1200 g при температуре 18 – 25 °С на протяжении 15 – 20 секунд.
  6. Легким покачиванием пробирки отделите осадок от дна. Оцените наличие агглютинатов. Присутствие гемолиза и/или агглютинатов означает:
    • несовместимость по системе АВ0;
    • наличие в сыворотке больного «холодовых» антител класса IgM или IgА, не специфичных к антигенам АВ0.

Выявление «тепловых» антител

  1. При отсутствии гемолиза и/или агглютинатов инкубируйте пробирку 10 – 15 минут при 37 °С.
  2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 – 20 секунд при комнатной температуре.
  3. Встряхните пробирку и проверьте наличие гемолиза и/или агглютинатов в супернатанте. Положительный результат говорит об обнаружении в сыворотке больного «тепловых» IgM-антител против антигенов эритроцитов донора.

Обнаружение IgG-антител в тесте Кумбса

  1. При отрицательном результате на прошлом этапе исследования добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 мл 0,9 % раствора NaCl.
  2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 – 20 секунд при температуре воздуха 18 – 25 °С. Пастеровской пипеткой аккуратно избавьтесь от супернатанта.
  3. Повторно выполните отмывание эритроцитов еще 2 – 3 раза.
  4. Добавьте в пробирку 1 – 2 капли антиглобулиновой сыворотки. Выполните тщательное перемешивание.
  5. Центрифугируйте пробирку при 1200 g 15 – 20 секунд.
  6. Аккуратно разбейте осадок эритроцитов и проведите визуальную оценку результата реакции. Выявление агглютинации означает присутствие в сыворотке больного IgG-антител против антигенов эритроцитов донора.
центрифугирование смеси
центрифугирование смеси
выявление агглютинации
выявление агглютинации
Переливание крови без риска для жизни