Реакция Кумбса

О компанииО насРегистрационные удостоверенияПатенты ПродукцияСтандартные эритроцитыПланшеты для типирования крови человека Прайс-лист Новости МетодикиРуководство по эксплуатацииПаспорт на планшет Методическая информация Контакты
Реакция Кумбса – эффективный метод выявления антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител крови человека в непрямой реакции агглютинации. Основа теста – использование при типировании антигенов эритроцитов специфических моноклональных реагентов на основе иммуноглобулинов класса G (IgG) с последующим применением на втором этапе реакции антиглобулиновой сыворотки Кумбса (АГС).

АГС производится путем смешивания сыворотки из крови лабораторных животных, иммунизированных иммуноглобулинами класса G человека, и моноклональных антител к одному из компонентов – C3D комплементу сыворотки человека. АГС вызывает агглютинацию эритроцитов, сенсибилизированных специфическими антителами. При отсутствии антител на эритроцитах под воздействием АГС положительная реакция не происходит.

Непрямая реакция Кумбса позволяет определить наличие:

  • антигенов эритроцитов, выявляемых IgG-реагентами («неполными» антителами, например, моноклональными реагентами анти-D, анти-FYa, анти-FYb);
  • антиэритроцитарных антител класса IgG.

Непрямой антиглобулиновый тест: выявление антигенов эритроцитов

Приводим методику непрямой реакции Кумбса на примере цоликлона анти-D IgG.

  1. Промаркируйте чистую пробирку: укажите ФИО исследуемого лица.
  2. Внесите в пробирку 2 капли (приблизительно 0,1 мл) цоликлона анти-D IgG.
  3. Добавьте 2 капли 5 % взвеси предварительно отмытых физиологическим раствором анализируемых эритроцитов. Смешайте исследуемые образцы с цоликлоном.
  4. Инкубируйте смесь на водяной бане или в термостате при 37 °С на протяжении 30 минут.
  5. Добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 - 10 мл физраствора.
  6. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g при 18 – 25 °С на протяжении одной минуты.
  7. Удалите физраствор.
  8. Повторно проведите процедуру отмывки эритроцитов с помощью центрифугирования еще 2 – 3 раза.
  9. Добавьте 2 капли антиглобулиновой сыворотки к осадку кровяных телец, выполните перемешивание.
  10. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g в течение минуты при температуре 18 – 25 °С.
  11. Добавьте с помощью дозатора или пастеровской пипетки 3 – 5 капель физраствора.
  12. Ресуспендируйте осадок и визуально оцените наличие агглютинации. Выраженные агглютинаты на дне пробирки на фоне прозрачного раствора свидетельствуют об обнаружении антигена эритроцитов. Непрозрачная суспензия кровяных телец говорит об отсутствии антигена.
маркировка пробирки
добавление цоликлона в пробирку
отбор образца крови
инкубация смеси в термостате
центрифугирование пробирки
внесение антиглобулиновой сыворотки
агглютинаты на дне пробирки
непрозрачная суспензия – отрицательный результат

Реакция Кумбса: скрининг изоиммунных антиэритроцитарных антител

Исследование осуществляется в рамках проведения пробы на индивидуальную совместимость по всем антигенам эритроцитов крови донора и реципиента. Заключение о полной совместимости сыворотки реципиента с эритроцитами донора производят на основании отсутствия гемолиза и/или агглютинации на всех этапах проведения анализа. Признаки гемолиза и/или агглютинации на каком-либо этапе тестирования говорят о несовместимости образцов крови.

Оценка совместимости по системе АВ0, обнаружение «холодовых» антител

  1. Приготовьте образец крови донора:
    • внесите в пробирку автоматическим дозатором 0,2 мл крови;
    • 3 раза отмойте эритроциты в 5,0 мл физиологического раствора;
    • ресуспендируйте осадок в 3 – 4 мл раствора с низкой ионной силой LISS.
  2. Промаркируйте вторую чистую пробирку: укажите ФИО реципиента и ФИО донора.
  3. Внесите автоматическим дозатором 0,1 мл сыворотки реципиента в промаркированную пробирку.
  4. Добавьте 2 капли 5 % суспензии эритроцитов в растворе LISS.
  5. Без промедления центрифугируйте смесь с центробежным ускорением 1200 g при температуре 18 – 25 °С на протяжении 15 – 20 секунд.
  6. Легким покачиванием пробирки отделите осадок от дна. Оцените наличие агглютинатов. Присутствие гемолиза и/или агглютинатов означает:
    • несовместимость по системе АВ0;
    • наличие в сыворотке больного «холодовых» антител класса IgM или IgА, не специфичных к антигенам АВ0.

Выявление «тепловых» антител

  1. При отсутствии гемолиза и/или агглютинатов инкубируйте пробирку 10 – 15 минут при 37 °С.
  2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 – 20 секунд при комнатной температуре.
  3. Встряхните пробирку и проверьте наличие гемолиза и/или агглютинатов в супернатанте. Положительный результат говорит об обнаружении в сыворотке больного «тепловых» IgM-антител против антигенов эритроцитов донора.

Обнаружение IgG-антител в тесте Кумбса

  1. При отрицательном результате на прошлом этапе исследования добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 мл 0,9 % раствора NaCl.
  2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 – 20 секунд при температуре воздуха 18 – 25 °С. Пастеровской пипеткой аккуратно избавьтесь от супернатанта.
  3. Повторно выполните отмывание эритроцитов еще 2 – 3 раза.
  4. Добавьте в пробирку 1 – 2 капли антиглобулиновой сыворотки. Выполните тщательное перемешивание.
  5. Центрифугируйте пробирку при 1200 g 15 – 20 секунд.
  6. Аккуратно разбейте осадок эритроцитов и проведите визуальную оценку результата реакции. Выявление агглютинации означает присутствие в сыворотке больного IgG-антител против антигенов эритроцитов донора.
центрифугирование смеси
выявление агглютинации
Переливание крови без риска для жизни