Определение группы крови цоликлонами
Определение групп крови цоликлонами осуществляется в реакции агглютинации. Цоликлоны представляют собой солевые растворы моноклональных антител для обнаружения антигенов эритроцитов человека. Каждый реагент строго специфичен соответствующему антигену. Моноклональные антиэритроцитарные антитела продуцируются гибридомами мыши или гетерогибридомами человек-мышь.
Методика проведения анализа
Алгоритм определения группы крови AB0 и резус-фактора цоликлонами облегчает и стандартизирует процедуру типирования. Позволяет однозначно интерпретировать результат реакции антиген/антитело. Для каждого исследования по системе AB0 достаточно одной серии реагентов. Объект исследования – цельная кровь, эритроцитарная масса, отмытые эритроциты, клетки крови в сыворотке или физрастворе.
В качестве примера приводим схему проведения типирования крови человека по системе антигенов AB0.
Характерное отличие AB0 от других систем – постоянное наличие в сыворотке здоровых людей антител к антигенам, которые отсутствуют на эритроцитах. Естественные Анти-A и Анти-B антитела относятся к иммуноглобулинам класса M. Выработанные в результате иммунизации антигеном A и B иммунные антитела – иммуноглобулины класса G. Анти-A и Анти-B антитела в сыворотке большинства людей – это смесь иммуноглобулинов M и G.
- Обеспечьте яркое освещение помещения и температуру воздуха 15 – 25 °C.
- Промаркируйте лунки планшета: Анти-A, Анти-B, Анти-AB.
- Добавьте в подписанные лунки по одной капле (приблизительно 0,1 мл) реагентов Анти-A, Анти-B, Анти-AB.
- Поместите по одной маленькой капле концентрированной эритроцитосодержащей среды (0,01 – 0,03 мл) рядом с большой каплей каждого реагента.
- В каждой из трех лунок отдельной стерильной стеклянной палочкой смешайте моноклональный реагент с кровью.
- Плавно покачивайте планшет 2,5 – 3 минуты. Обычно агглютинация формируется в течение 5 – 10 секунд. Запас времени необходим для обнаружения слабых вариантов антигенов.
- Проведите визуальную оценку результатов реакции в каждой лунке. Результат реакции свидетельствует об обнаружении соответствующего агглютиногена.
Результаты реакции
Таблица результатов типирования крови с помощью цоликлонов.
| Групповая принадлежность | Моноклональный реагент | ||
|---|---|---|---|
| Анти-A | Анти-B | Анти-AB | |
| 0(I) | - | - | - |
| A(II) | + | - | + |
| B(III) | - | + | + |
| AB(IV) | + | + | + |
«+» - положительный результат реакции;
«-» - отсутствие агглютинации.
- Отрицательный результат реакции во всех трех лунках свидетельствует об отсутствии агглютиногенов. Группа: 0(I).
- Агглютинация с Анти-A и Анти-AB говорит о наличии агглютиногена A. Групповая принадлежность: A(II).
- Реакция в лунках с Анти-B и Анти-AB указывает на наличие антигена B. Групповая принадлежность: B(III).
- Реакция во всех трех лунках говорит о присутствии обоих антигенов. Группа: AB(IV).
Методика проведения исследования с помощью цоликлонов требует обязательного подтверждения результатов реакции выявлением агглютининов α и β стандартными эритроцитами.
Алгоритм определения резус-фактора представлен в соответствующей статье.
- Рагимов, А.А. Трансфузионная иммунология/А.А. Рагимов, Н.Г. Дашкова. — М.: Медицинское информационное агентство, 2004. — 279 с.
- Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови/Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. — СПб.: Питер, 2000. — 308 с.
- Минеева, Н.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии — СПб.: Издательско-полиграфический комплекс «Гангут», 2020. — 360 с.
