Определение резус-фактора цоликлонами

О компанииО насРегистрационные удостоверенияПатенты ПродукцияСтандартные эритроцитыПланшеты для типирования крови человека Прайс-лист Новости МетодикиРуководство по эксплуатацииПаспорт на планшет Методическая информация Контакты

Первичное определение резус-фактора цоликлонами Анти-D-Супер (Анти-D IgM) осуществляется в реакции прямой агглютинации. Реагент представляет собой моноклональные IgM антитела человека. Агглютинирует эритроциты с антигеном D, ослабленным Du и частичными вариантами DI - DV, DVII. Положительный результат проявляется в образовании явно различимых агглютинатов и просветлении поля реакции. Не вызывает агглютинацию D-отрицательных эритроцитов и кровяных телец с антигеном DVI.

цоликлон Анти-D IgM

В случае первичного отрицательного результата у доноров на втором этапе исследования проводят выявление DVI с использованием цоликлона Анти-D в реакции конглютинации с желатином или в непрямом тесте Кумбса. Для реципиентов дополнительный анализ с анти-D IgG антителами не осуществляется.

Исследуемые образцы

Нативная кровь, стабилизированная консервантами; кровь без антикоагулянта, в том числе взятая из пальца. Образцы хранятся до 3 суток при 2 – 8 °С.

Приводим пошаговый алгоритм определение резус-фактора на пластинке, технику проведения исследования в круглодонной пробирке и в планшете. Перед началом тестирования обеспечьте яркое освещение и температуру воздуха в помещении 18 – 25 °С.

Типирование на плоскости

  1. Промаркируйте пластину: укажите ФИО пациента и название реагента.
  2. Нанесите на плоскость одну каплю (приблизительно 0,1 мл) реагента Анти-Д-Супер.
  3. Рядом поместите одну маленькую каплю (0,01 – 0,05 мл) эритроцитов.
  4. Чистой стеклянной или пластмассовой палочкой смешайте две капли.
  5. Подождите 10 – 15 секунд.
  6. Плавно покачивайте пластинку на протяжении 20 – 30 секунд.
  7. Оцените результат через 3 минуты.
Обычно характерная крупнолепестковая гемагглютинация наблюдается спустя 30 – 60 секунд, но при наличии антигена Du время реакции увеличивается. Подогревание пластины до 37 °С увеличивает скорость реакции.

Техника определения в пробирке

  1. Подготовьте 5 % взвесь отмытых эритроцитов в физрастворе.
  2. Добавьте в пробирку 0,1 мл цоликлона Анти-D-Супер (Анти-D IgM) и одну каплю эритроцитов.
  3. Перемешайте содержимое.
  4. Инкубируйте пробирку на протяжении получаса. Скорость реакции увеличивается при подогреве пробирки до 37 °С с использованием водяной бани или термостата.
  5. Центрифугируйте пробирку со скоростью 1500 — 2000 оборотов в минуту при комнатной температуре на протяжении полминуты.
  6. Слегка встряхните пробирку для отделения осадка от дна.
  7. Визуально оцените наличие агглютинации. При обнаружении антигена D образуются один или несколько явно различимых агглютинатов на фоне прозрачного раствора NaCl. В противном случае осадок легко разбивается и является непрозрачной гомогенной взвесью.
инкубация в термостате
инкубация в термостате
центрифугирование
центрифугирование
выраженные агглютинаты
выраженные агглютинаты
непрозрачная суспензия
непрозрачная суспензия

Алгоритм определения в планшете

  1. Внесите в лунку планшета 50 – 100 мкл реагента.
  2. Добавьте 50 мкл 5 % взвеси эритроцитов в растворе NaCl.
  3. Перемешайте пипетированием.
  4. Инкубируйте при температуре 18 – 25 °С один час.
  5. Проведите визуальную оценку осадка эритроцитов на дне лунки. В случае положительного результата RhD-типирования агглютинаты с неровными четко очерченными краями равномерно выстилают дно. При отсутствии антигена D наблюдается осадок в виде точки.
отбор образца крови
отбор образца крови
фенотипирование проб по наиболее клинически значимым антигенам эритроцитов
фенотипирование проб по наиболее клинически значимым антигенам эритроцитов
визуальная оценка при исследовании проб на наличие клинически значимых антигенов эритроцитов
визуальная оценка при исследовании проб на наличие клинически значимых антигенов эритроцитов
Переливание крови без риска для жизни