Определение резус-фактора цоликлонами

О компанииО насРегистрационные удостоверенияПатенты ПродукцияСтандартные эритроцитыПланшеты для типирования крови человека Прайс-лист Новости МетодикиРуководство по эксплуатацииПаспорт на планшет Методическая информация Контакты

Первичное определение резус-фактора цоликлонами Анти-D-супер осуществляется в реакции прямой агглютинации. Реагент представляет собой моноклональные IgM антитела человека. Агглютинирует эритроциты с антигеном D, ослабленным Du и частичными вариантами DI - DV, DVII. Положительный результат проявляется в образовании явно различимых агглютинатов и просветлении поля реакции. Не вызывает агглютинацию D-отрицательных эритроцитов и кровяных телец с антигеном DVI.

В случае первичного отрицательного результата у доноров на втором этапе исследования проводят выявление DVI с использованием цоликлона Анти-D в реакции конглютинации с желатином или в непрямом тесте Кумбса. Для реципиентов дополнительный анализ с анти-D IgG антителами не осуществляется.

Исследуемые образцы

Нативная кровь, стабилизированная консервантами; кровь без антикоагулянта, в том числе взятая из пальца. Образцы хранятся до 3 суток при 2 – 8 °С.

Приводим пошаговый алгоритм определение резус-фактора на пластинке, технику проведения исследования в круглодонной пробирке и в планшете. Перед началом тестирования обеспечьте яркое освещение и температуру воздуха в помещении 18 – 25 °С.

Типирование на плоскости

  1. Промаркируйте пластину: укажите ФИО пациента и название реагента.
  2. Нанесите на плоскость одну каплю (приблизительно 0,1 мл) реагента Анти-Д-супер-супер.
  3. Рядом поместите одну маленькую каплю (0,01 – 0,05 мл) эритроцитов.
  4. Чистой стеклянной или пластмассовой палочкой смешайте две капли.
  5. Подождите 10 – 15 секунд.
  6. Плавно покачивайте пластинку на протяжении 20 – 30 секунд.
  7. Оцените результат через 3 минуты.
Обычно характерная крупнолепестковая гемагглютинация наблюдается спустя 30 – 60 секунд, но при наличии антигена Du время реакции увеличивается. Подогревание пластины до 37 °С увеличивает скорость реакции.

Техника определения в пробирке

  1. Подготовьте 5 % взвесь отмытых эритроцитов в физрастворе.
  2. Добавьте а пробирку 0,1 мл цоликлона Анти-D-Супер и одну каплю эритроцитов.
  3. Перемешайте содержимое.
  4. Инкубируйте пробирку на протяжении получаса. Скорость реакции увеличивается при подогреве пробирки до 37 °С с использованием водяной бани или термостата.
  5. Центрифугируйте пробирку со скоростью 1500 — 2000 оборотов в минуту при комнатной температуре на протяжении полминуты.
  6. Слегка встряхните пробирку для отделения осадка от дна.
  7. Визуально оцените наличие агглютинации. При обнаружении антигена D образуются один или несколько явно различимых агглютинатов на фоне прозрачного раствора NaCl. В противном случае осадок легко разбивается и является непрозрачной гомогенной взвесью.

Алгоритм определения в планшете

  1. Внесите в лунку планшета 50 – 100 мкл реагента.
  2. Добавьте 50 мкл 5 % взвеси эритроцитов в растворе NaCl.
  3. Перемешайте пипетированием.
  4. Инкубируйте при температуре 18 – 25 °С один час.
  5. Проведите визуальную оценку осадка эритроцитов на дне лунки. В случае положительного результата RhD-типирования агглютинаты с неровными четко очерченными краями равномерно выстилают дно. При отсутствии антигена D наблюдается осадок в виде точки.
Переливание крови без риска для жизни